Tau蛋白激酶1 (TTBK1) 是一种丝氨酸/苏氨酸/酪氨酸激酶，能够磷酸化tau蛋白中的多个残基。过度磷酸化的tau蛋白是tau蛋白病（例如阿尔茨海默病 (AD)）的主要原因。因此，抑制TTBK1以阻止tau蛋白磷酸化被认为是AD的一种治疗策略。然而，目前已报道的TTBK1底物很少，且靶向TTBK1的抑制剂也寥寥无几。本研究从一个小型肽库中筛选出荧光素酰胺 (FAM) 标记的肽15，作为人TTBK1 (hTTBK1) 的最佳肽底物。随后，我们开发并验证了一种基于微流控技术的迁移率变动分析 (MMSA) 方法，该方法使用肽15作为底物。此外，我们还证实肽15也可用于ADP-Glo激酶活性测定。本研究利用已建立的分子标记多组分筛选（MMSA）方法筛选了包含427种化合物的激酶抑制剂库，从中筛选出5种对hTTBK1具有IC50值（微摩尔级）的化合物。其中，化合物AZD5363、A-674,563和GSK690693以ATP竞争性方式抑制hTTBK1，分子对接模拟结果表明，它们能够进入ATP结合口袋，并与hTTBK1的铰链区形成一到两个氢键。另一化合物白藜芦醇则表现出对hTTBK1的非ATP竞争性抑制作用，可作为开发高选择性hTTBK1抑制剂的起点。综上所述，本研究为开发新型hTTBK1抑制剂提供了一个新的体外平台，这些抑制剂可能在阿尔茨海默病（AD）的预防中具有潜在的应用价值。
